L'affresco è collocato sopra la porta d'ingresso all'ambiente e abbraccia tutta la larghezza della parete. Nell'estremità sinistra della lunetta un uomo con il braccio fasciato è affiancato da un personaggio barbuto e viene indirizzato da un terzo uomo girato di spalle verso l'ospedale posto all’estremità destra del dipinto. Qui una figura vestita di nero, forse uno Spedalingo, accoglie un gruppo di infermi composto da una donna con un bambino e tre mendicanti, e li esorta a dirigersi verso le corsie dell’ospedale dove alcuni inservienti stanno prestando assistenza al capezzale di un ammalato. Al centro del dipinto campeggia la visione della Madonna col Bambino che appare tra le nubi popolate di cherubini e angioletti. Alla destra della Vergine è S. Giovanni Battista, patrono della città di Firenze, e alla sua sinistra un monaco vestito di bianco che con gesto eloquente raccomanda gli ammalati alla Madonna. Ai piedi delle figure sacre un angioletto esibisce la gruccia con ascellare rosso, stemma di Santa Maria Nuova, e un altro reca la mitra vescovile, mentre il pastorale è tra le mani di terzo angioletto in alto. Assieme alla presenza della cerva questi attributi alludono a S. Egidio, patrono della chiesa dell’ospedale, mentre l’iconografia del monaco rappresentato, sbarbato e vestito di bianco, permettono di identificarlo con il Beato Bernardo Tolomei, fondatore dell’ordine olivetano a cui apparteneva Filippo Guilliccioni, Spedalingo dell’Ospedale dal 1577 al 1587